目的 探讨新生儿败血症的临床特征、病原菌及耐药性变化，为临床诊疗提供依据。方法 对云南省第一人民医院2015年1月至2019年12月收住新生儿病房的166例新生儿败血症进行回顾性调查，根据发病时间分为早发败血症（EOS）组和晚发败血症（LOS）组，分析临床特征、病原菌分布及耐药率。结果 EOS组121例（72.9%），患儿呼吸系统症状、皮肤脓疱、母亲羊水浑浊及胎膜早破发生率明显高于LOS组（P＜0.05）；LOS组45例（27.1%），黄疸、消化道症状、医院内感染发生率及早期早产儿、极低出生体重儿构成比高于EOS组（P＜0.05）。EOS以革兰阴性菌为主（57.0%），凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）、唐菖蒲伯克霍尔德菌、大肠埃希菌及无乳链球菌为主要致病菌；LOS以革兰阳性菌为主（62.2%），CNS、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌为主要致病菌。5年间革兰阳性菌以CNS为主，革兰阴性菌年度分布变化较大。常见革兰阳性菌对青霉素类、克林霉素、大环内脂类抗菌药物耐药率较高，未检出对万古霉素及利奈唑胺耐药菌株；常见革兰阴性菌对氨苄西林耐药率高，对β-内酰胺酶抑制剂复合物、碳青霉烯类和氨基糖苷类抗生素耐药率较低。结论 CNS是昆明地区新生儿败血症最常见病原体，EOS与LOS临床特征及病原菌不同。