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摘要：
本发明公开了一种用同源重组方法构建的含CCL5和SSTR2基因的重组痘病毒rVV‑CCL5‑SSTR2‑Luc+，该痘病毒的构建利用含人CCL5、SSTR2目的基因和Luciferase荧光素酶报告基因的穿梭质粒pSC65与痘病毒WR株具有相同的TK侧翼的特点，在痘病毒易感细胞BS‑C‑1中发生同源重组而将目的基因整合到痘病毒基因组中，实现重组痘病毒rVV‑CCL5‑SSTR2‑Luc+的构建任务；本发明制得的重组痘病毒rVV‑CCL5‑SSTR2‑Luc+能高效表达外源基因，同时CCL5与CIK细胞表面高表达的CCR5相匹配以及SSTR2定向诱导奥曲肽靶向肿瘤细胞具有独特优势，有利于在临床推广应用，用于各类肿瘤的治疗。
主权项：
1.一种含CCL5和SSTR2基因的重组痘病毒，其特征在于：为含有人CCL5和人SSTR2基因的WR株重组痘病毒；所述含CCL5和SSTR2基因的重组痘病毒按如下步骤进行制备：（1）分别以含人CCL5和人SSTR2cDNA序列的质粒为模板，采用如下引物进行PCR扩增，将PCR产物和pSC65质粒分别经内切酶酶切、电泳、切胶纯化回收，获得相应DNA片段，然后连接、转化，挑取阳性细菌克隆小提质粒，其中人CCL5基因插入p7.5启动子下游，人SSTR2基因插入pE/L启动子下游；阳性细菌克隆小提质粒经PCR、电泳和测序鉴定序列正确者命名为pSC65-CCL5-SSTR2-Luc+；CCL5F：5’-AGCGCAGAGGGCAGTAGCAAT-3’CCL5R：5’-TGATGTACTCCCGAACCCA-3’；SSTR2F：5’-AAGCAGGCTGGTACCGGTCCGGAATTCCC-3’SSTR2R：5’-ATAGGCCGGCCAGGATCGATCCAGACATGAT-3’；（2）将pSC65-CCL5-SSTR2-Luc+质粒与痘病毒WR株进行同源重组，然后筛选阳性重组子，经纯化、验证，最终获得含人CCL5和SSTR2基因的重组痘病毒rVV-CCL5-SSTR2-Luc+。
