资源类型：
收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ CSCD-E
文章类型：
机构：
[1]昆明理工大学医学院,云南昆明 650500
[2]中国科学院天津工业生物技术研究所,天津300308
[3]云南省第一人民医院,昆明理工大学附属医院,云南昆明650500
云南省第一人民医院
[4]云南省临床微生物学与分子研究中心,云南昆明 650500
出处：
ISSN：
关键词：
转酮酶
酶活测定
木酮糖激酶
摘要：
目的 转酮酶是非氧化磷酸化戊糖途径中的关键酶.5-磷酸木酮糖是分析测定转酮酶酶活性的底物,然而因该底物难以化学合成,生产成本高,从而导致厂家停止生产,目前市场上无法得到.因此有必要建立起新的转酮酶酶活测定方法.方法 (1)将酿酒酵母的木酮糖激酶基因(XKS1)克隆于pET30a载体.(2)纯化木酮糖激酶.(3)建立酶偶联反应,以木酮糖为底物,将其转化为5-磷酸木酮糖,用于转酮酶酶活的测定.结果 (1)成功地将XKSI基因克隆于pET 30a得到质粒pXZ-X004.(2)质粒pXZ-X004诱导表达产生C端His-tag标签的XK,用Ni柱分离得到纯化的木酮糖激酶(XK).(3)纯化的XK活性为21.0 U/mg protein,当用12.5％的甘油保存于-80℃环境1个月,仍有74％的活性.(4)用纯化的XK建立了转酮酶(TK)酶活测定新方法,当TK酶活低至0.008 75 U时仍能够利用新方法检测.结论 本实验通过克隆和表达XKS1基因,成功地建立了TK酶活性测定的新方法,并应用于木糖代谢工程菌株TK酶活的测定,为医学和生态学领域中TK酶活的分析奠定了基础.
基金：
国家自然科学基金资助项目(31300089)%云南科技计划面上项目(2014NS247)
基金编号：
31300089
第一作者：
第一作者机构：
[1]昆明理工大学医学院,云南昆明 650500
[2]中国科学院天津工业生物技术研究所,天津300308
通讯作者：
通讯机构：
[1]昆明理工大学医学院,云南昆明 650500
[3]云南省第一人民医院,昆明理工大学附属医院,云南昆明650500
[4]云南省临床微生物学与分子研究中心,云南昆明 650500
推荐引用方式(GB/T 7714)：
李胜营,朱欣娜,毛小琴.建立转酮酶酶活测定方法及应用[J].中国微生态学杂志.2016,28(07):840-845.
