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◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
文章类型:
机构:
[1]昆明医科大学神经科学研究所,云南省昆明市,650500
[2]云南省第一人民医院普外二科,云南省昆明市,650032
外科片
普外二科
云南省第一人民医院
[3]昆明理工大学医学院,云南省昆明市,650500
出处:
ISSN:
关键词:
组织构建
组织工程
皮质神经元
SD大鼠
细胞培养
国家自然科学基金
摘要:
背景:神经元的体外原代培养在研究神经系统的发育、再生、信号转导机制、神经药理学以及基因表达方面具有极其重要的地位。<br> 目的:建立一种操作更加简单且能够得到较高纯度新生SD大鼠皮质神经元原代培养的方法。<br> 方法:取1 d新生SD大鼠皮质。传统方法实验组:取整个皮质;改良方法实验组:取SD大鼠表面2.0-3.0 mm处皮质。木瓜蛋白酶消化后离心,制备成单细胞悬液,以1×105/孔的浓度接种至含神经元培养液的24孔培养板进行原代培养。培养3 d时采用免疫细胞化学染色方法,使用神经元特异性标志物Tuj1与MAP-2双标记法鉴定所培养的细胞;采用倒置相差显微镜观察6,24,48,72 h及5,7d细胞数和突起长度并记录。<br> 结果与结论:①所培养的细胞可表达神经元特异性标志物Tuj1与MAP-2,因此所培养细胞为神经元,可用于之后实验;②实验组培养至第3天时神经元的纯度已达到峰值92%,而普通实验组神经元的纯度为51%;③2组细胞培养至6 h均已贴壁且长处小突起,培养至第3天时,细胞已初步形成神经网络,培养至5 d时神经网络密集;④研究所用方法简便能够稳定的培养出纯度较高的神经元,可以用于SD大鼠皮质源性神经元的相关实验研究。
基金:
国家自然科学基金(31560295,31260253,81260075);云南省应用基础研究昆医联合专项(2015FB098,2014FZ066);云南省教育厅科学研究基金项目(2014C020Y);2014年省级临床重点专科建设项目-普外科(云南省第一人民医院)
第一作者:
第一作者机构:
[1]昆明医科大学神经科学研究所,云南省昆明市,650500
通讯作者:
推荐引用方式(GB/T 7714):
王东艳,杨金伟,程敬茹,等.一种新生SD大鼠皮质源性神经元的培养方法[J].中国组织工程研究.2016,20(51):7672-7677.