资源类型：
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◇ 统计源期刊
文章类型：
机构：
[1]中山大学附属第三医院不育与性医学科,广州,510630
中山大学附属第三医院
[2]云南省第一人民医院生殖遗传一科,昆明,650032
门急诊片
生殖医学科
云南省第一人民医院
[3]中山大学附属第三医院泌尿外科,广州,510630
中山大学附属第三医院
出处：
ISSN：
关键词：
PnNOS基因
脂肪源性干细胞
重组腺病毒
勃起功能障碍
大鼠
摘要：
目的 构建过表达大鼠阴茎神经源性一氧化氮合酶(PnNOS)基因大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs),为基因修饰ADSCs移植治疗勃起功能障碍(ED)大鼠模型提供种子细胞.方法 获取大鼠PnNOS基因,并与线性化的腺病毒真核表达载体pDC315-EGFP定向克隆连接.构建正确的pDC315-PnNOS-EGFP穿梭质粒转染293 T细胞,采用Western Blot检测PnNOS基因在293 T细胞中的表达情况.利用AdMax腺病毒包装系统包装产生重组腺病毒,包装后扩增纯化并测定病毒滴度.PnNOS基因重组腺病毒转染大鼠ADSCs,观察GFP表达情况和Western Blot检测PnNOS基因表达情况.结果 经PCR鉴定、限制性酶切分析、测序鉴定和目的质粒Western Blot表达检测鉴定,证实pDC315-PnNOS-EGFP重组腺病毒载体构建成功.重组腺病毒包装成功且病毒滴度为5.0×1 09 PFU/ml.Western Blot于大鼠ADSCs中检测到约161 KDa大小条带,其与PnNOS蛋白分子量大小基本相一致.结论 大鼠PnNOS基因修饰的ADSCs构建成功,从而为基因修饰ADSCs移植治疗ED提供了良好的基因工程细胞.
基金：
国家自然科学基金资助项目;中国博士后科学基金资助项目;广东省自然科学基金资助项目;广东省科技计划项目基金资助项目;广东省医学科研基金资助项目;广东省科技计划项目;国家自然科学基金项目
第一作者：
第一作者机构：
[1]中山大学附属第三医院不育与性医学科,广州,510630
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
陈俊,胡志明,转黎,等.大鼠pnnos基因修饰脂肪源性干细胞的构建[J].中华腔镜泌尿外科杂志（电子版）.2014,8(4):52-56.
