目的：探讨昆明市10岁以下儿童大环内酯类耐药肺炎支原体感染情况分析。方法：收集昆明市儿童医院社区获得性呼吸道感染患儿500例，其中男237例，女263例，年龄3～10岁。采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增并测序肺炎支原体耐药株的23S rRNA基因靶区V区域。聚类分析用于预测耐药支原体的变异与传播。结果：在500例呼吸道感染患儿的痰标本中，成功培养出213株，其中药敏菌株70株，中敏菌株96株，耐药菌株47株，耐药菌株检出率为22.06%。用23S rRNAV区引物进行PCR扩增出47株耐药菌株，8株耐药菌株未能扩增，39个耐药菌株的目标条带成功扩增。测序结果显示：16株菌株与标准菌株M129高度同源，16株耐药菌株中，有4株与标准菌株M129相比无基因位点突变。4株含有A2063G转化，3株含有A2064G转化，5株含有A2064C转化。2064点突变的频率（大肠杆菌中为2059）比2063点突变的频率高得多。人耐药肺炎支原体对5种抗生素的表型耐药模式因突变位置不同而不同。突变株A2063G表现出对红霉素和罗红霉素的抗性，突变株A2064G表现出对红霉素和交叉霉素的抗性，突变株A2064C表现出对红霉素的抗性。结论：该研究有助于更好地筛选抗支原体药物，并在临床上更好地治疗对支原体有耐药性的感染患儿。