目的 通过全外显子组测序（WES）技术分析性发育异常（DSD）患者的分子遗传学病因，以加深对DSD致病机制的认识。方法 收集2008年3月-2021年8月于云南省第一人民医院就诊的60例DSD患者的临床资料进行回顾性分析，并对其中1个先证者进行家系研究。提取所有患者的外周血基因组DNA进行WES测序分析，WES结果利用SAMtools软件、单核苷酸多态性（SNP）数据库、InDel数据库进行SNP和InDel检测；采用ExomeDepth进行外显子水平的拷贝数变异（CNV）检测；应用PolyPhen-2、Mutation taster、PyMol软件进行突变的有害性预测，并采用Sanger进行测序验证。结果60例DSD患者中，22例为46,XX DSD,38例为46,XY DSD。22例46,XX DSD患者中14例存在SRY基因；在另外8例患者和其中1个先证者家系中，2例患者的NR5A1、PROKR2和ANOS1基因发生单核苷酸变异（SNV）,4例患者中的CYP21A2基因发生CNV，其中CYP21A2 EX1 Dup已有该变异的相关致病性报道，其余3个CNV为意义未明的变异，2例未检出与DSD相关的基因突变位点。38例46,XY DSD患者WES分析结果中，14例中检出了10个致病或疑似致病变异位点，包括SRY、AR、SRD5A2、CYP17A1、NR5A1等5个基因；5例中检出CYP21A2、AKR1C2、CBX2、NR5A1基因的5个疑似致病的CNV，其中3个微缺失，2个微重复。WES结果中NR5A1（c.722G＞T、c.48C＞G）、ANOS1 c.564A＞T变异为首次报道的位点，在检出的CNV中，CYP21A2 EX1 Dup在相关数据库中有致病性的报道，其余未见报道。结论 WES技术的应用提高了对DSD的诊断能力，拓展了现有的DSD相关致病基因突变谱数据，丰富了对DSD致病机制的认识，可为开展遗传咨询提供帮助。