资源类型：
收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-C
文章类型：
机构：
[1]昆明理工大学医学院,昆明理工大学附属医院,昆明650500
云南省第一人民医院
[2]昆明理工大学生命科学与技术学院,云南省分子医学研究中心,昆明650500
出处：
ISSN：
关键词：
人轮状病毒
VP6基因
TaqMan荧光定量PCR
摘要：
目的 本研究旨在建立一种快速准确定量检测人G1型轮状病毒的TaqMan探针荧光实时PCR检测方法.方法 以轮状病毒VP6基因为靶基因,分别设计2对引物及其相应的TaqMan探针,扩增目的片段,将目的片段克隆于PCD-NA3.1+载体上,体外转录获得RNA,系列稀释后为标准品,建立TaqMan探针荧光定量实时PCR检测方法并对该方法进行验证.结果 设计实验找到最优条件下的引物浓度(250 nmol/L)、探针浓度(300 nmol/L);通过对引起腹泻的人柯萨奇病毒、呼肠孤病毒等进行检测,结果均为阴性,表明该方法具有很好的特异性.该方法的最低检测量为5 copies/μL.对该方法进行重复性实验,发现变异率均小于1％,重复性好.用已建立的方法对4份粪便临床样品进行3次重复试验,病毒RNA的检出率为100％.结论 本实验初步建立了人G1型轮状病毒TaqMan探针荧光实时PCR检测方法,为G1型轮状病毒的诊断、检测和分子流行病学研究提供了一种新的方法.
基金：
国家科技支撑计划项目(No.2014BAI01B01) Supported by the National Sci-Tech Support Plan (2014BAI01B01)
第一作者：
第一作者机构：
[1]昆明理工大学医学院,昆明理工大学附属医院,昆明650500
[2]昆明理工大学生命科学与技术学院,云南省分子医学研究中心,昆明650500
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
彭杰,胡晓星,冯悦,等.人G1型轮状病毒TaqMan荧光定量检测方法的建立与应用[J].中国人兽共患病学报.2016,32(06):512-517.
