资源类型：
收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-C
文章类型：
机构：
[1]昆明理工大学生命科学与技术学院分子病毒实验室,云南昆明,650500
[2]解放军昆明总医院检验科,云南昆明,650032
[3]昆明理工大学附属医院云南省第一人民医院检验科,云南昆明,650032
医技片
检验科
云南省第一人民医院
[4]云南大学化学科学与工程学院自然资源药物化学重点实验室,云南昆明,650091
出处：
ISSN：
关键词：
RACK1
过表达
RNA干扰
HUVEC细胞系
摘要：
目的：建立有活性的蛋白激酶C受体1（RACK1）过表达和低表达人脐静脉内皮细胞系（HUVEC），为进一步从分子水平研究RACK1在心律失常中的作用机制提供有效手段。方法扩增RACK1基因的全长cDNA序列，并插入pIRES2-EGFP获得过表达载体pIRES2-EGFP-RACK1；同时，设计合成3对短发夹结构的互补DNA序列和一对阴性对照序列，亚克隆至pGenesil-1得到相应的干扰载体；脂质体转染法将重组体及相应的空质粒分别转染至HUVEC细胞，经 G418筛选抗性细胞克隆， qRT-PCR 及 Western blot 鉴定 RACK1 mRNA 和蛋白的表达。结果RACK1真核表达载体和RNA干扰载体构建成功。重组体经脂质体法转染HUVEC 48 h后，经G418筛选3周得到细胞抗性克隆，qRT-PCR及Western blot结果证实了过表达载体和干扰载体能有效的增强和沉默HUVEC细胞中RACK1的表达。结论成功建立了RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系。
基金：
国家自然科学基金(81260248)；云南省应用基础研究计划(2011FB216，2011FB217)
第一作者：
第一作者机构：
[1]昆明理工大学生命科学与技术学院分子病毒实验室,云南昆明,650500
共同第一作者：
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
张丽,贾雄飞,牛华,等.RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系的建立和鉴定[J].基础医学与临床.2015,35(02):218-223.
